KINYOUN-FARGING: BEGRUNNELSE OG TEKNIKKER - BIOLOGI - 2025

Den Kinyoun farging er et farveteknikk som brukes til å farge bakterier og parasitter motstandsdyktig syre alkohol. Den ble født fra modifiseringen av Ziehl-Neelsen fargelegging; Begge teknikker blir tolket på samme måte, men avviker i to elementer: i fremstillingen av hovedreagenset og ved at Kinyoun-teknikken ikke bruker varme.

Av denne grunn er det også kjent som kaldmodifisert Ziehl-Neelsen eller Kinyoun kald flekk. Det er indikert for farging av Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypiske mycobacteria, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris og Cyclosporas cayetanensis.

Cryptosporidium parvum farget med Kinyoun-flekk. Punlop Anusonpornperm, fra Wikimedia Commons

Det er verdt å merke seg at Nocardia farger svakt med denne teknikken siden de er delvis syre-alkoholbestandige, så for denne slekten er det en modifisering av metodikken.

I sin tur har den kalde Kinyoun-teknikken blitt kombinert med trikrom-teknikken modifisert av Didier for påvisning av coccidia (Cryptosporidium parvum og Isospora belli) og microsporidia-sporer (Enterocytozoon bieneusi og Encephalitozoon intestinalis).

Basis

Hovedfargingsreagenset er karbolfuksin eller karbolfuksin, som har egenskapen å binde seg til karbolsyrer som finnes i den lipidrike voksagtige celleveggen (mykolsyrer) av mykobakterier og visse parasitter.

Denne bindingen motvirkes ikke av surblekemiddel; derfor er mikroorganismer definert som syrefaste.

I motsetning til Ziehl-Neelsen-teknikken - som fikser fargestoffet gjennom varme - er dette trinnet i Kinyoun-teknikken ikke nødvendig, siden den karboliske fuchsinløsningen forberedt for denne teknikken inneholder en høy konsentrasjon av fenol.

Fenol løser opp lipidmaterialet i celleveggen, slik at karbolfuchsinfargestoffet kan komme inn. Etter at fargestoffet trenger inn, forblir det fast til tross for vask med sur alkohol.

På denne måten tar de syrraske mikroorganismene den karakteristiske røde fargen, mens alt som ikke er syrefast blir misfarget og flekker blått.

Teknikk

materialer

- Modifisert carbol fuchsin.

- Alkohol-syre.

- Metylenblått.

Forberedelse av Kinyoun carbol fuchsin

- Grunnleggende fuchsin: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destillert vann: 100 ml.

Den grunnleggende fuchsin bør oppløses sakte i alkoholen, blandes konstant. Deretter smeltes den krystalliserte fenol i et vannbad ved 56 ° C. Når den er oppløst, tilsettes 8 ml til fuchsinløsningen fremstilt ovenfor.

Tilberedning av syre-alkoholen

- Konsentrert saltsyre: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

Det måles, sammenføyes og blandes.

Fremstilling av metylenblått kontrastfargestoff

- Metylenblått: 0,3 g.

- Destillert vann: 100 ml.

Det veies og oppløses.

Kinyoun fargingsteknikk

1- Forbered et smør direkte fra prøven, som kan være sputum, lungevæske, urinsediment, cerebrospinalvæske eller avføring, blant andre; eller fra en suspensjon av mikroorganismer oppnådd fra rene kolonier utviklet i primære kulturmedier.

2- Fest smøret med varme.

3- Plasser utstrykningen på fargebroen og dekk til med den tilberedte Kinyoun-karbolfuchsinreagensen. La den hvile i 3 til 5 minutter.

4 - Vask med destillert vann.

5 Blek med sur alkohol i 3 minutter og vask igjen med destillert vann.

6- Blek igjen med sur alkohol i 1 eller 2 minutter til det ikke blir mer fargelegging.

7- Vask med destillert vann og la det renne ut, og legg lysbildet i loddrett stilling.

8- Dekk tilberedningen med metylenblått og la virke i 4 minutter.

9- Vask med destillert vann og la lufttørke.

10- Undersøk ved 40X og deretter ved 100X.

For å forbedre og fremskynde farging av syrehurtige mikroorganismer, tilsett 1 dråpe fuktemiddel (for eksempel Tergitol nr. 7) til 30 eller 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.

Noen laboratorier endrer metylenblått kontrastfargestoff til lysegrønn eller pikrinsyre; den første gir en grønn farge på bakgrunnen og den andre genererer en gul farge.

Spesiell Kinyoun-teknikk for nokardier

For å forbedre fargingen av bakterier i slekten Nocardia brukes en modifisering av Kinyoun-flekken. Teknikken er som følger:

1- Dekk utstrykningen med Kinyoun carbol fuchsin i 3 minutter.

2- Vask med destillert vann.

3 - Misfarg kort med sur alkohol tilberedt på 3% til det ikke blir mer fargelegging.

4 - Vask igjen med destillert vann.

5- Dekk preparatet med metylenblått og la det virke i 30 sekunder.

6- Vask med destillert vann og la lufttørke.

Kombinert karbol fuchsin og trikrom teknikk modifisert av Didier

Denne teknikken anbefales for analyse av avføringsprøver for koksidier og Microsporidium sporer samtidig. Fremgangsmåten som følger er som følger:

1- Dekk utstrykningen med Kinyoun carbol fuchsin i 10 minutter.

2- Fjern fargestoffet og vask med destillert vann.

3 - blekemiddel i 30 sekunder med saltsyrealkohol.

4 - Vask igjen med destillert vann.

5- Dekk utstrykningen med trikromløsning i 30 minutter ved 37 ° C.

6- Vask med destillert vann.

7- Blek i 10 sekunder med eddiksyrealkohol.

8- Vask smøret i 30 sekunder ved å bruke 95% etanol.

QA

Som en positiv kontroll blir smør med Mycobacterium tuberculosis-stammer tilberedt og farget med reagensene forberedt for å verifisere at bakteriene får riktig farge (rød-fuchsia).

Negative kontroller kan også brukes ved å tilberede utstryk med en hvilken som helst annen stamme enn syrefaste, og dermed kontrollere at hele prøven tar den kontrasterende fargen.

Kinyoun-teknikk sammenlignet med Ziehl-Neelsen-teknikken

Kinyoun-teknikken er enklere siden den eliminerer oppvarmingstrinnet, men hovedfordelen er at den unngår utslipp av damper, som er svært giftige og kreftfremkallende på lang sikt. Derfor er Kinyoun-flekken sikrere for farging av personell.

Det er viktig å ta hensyn til at reagensene ikke kommer i direkte kontakt med huden, da de er etsende og blekemiddelet er brannfarlig.

Når det gjelder ulempene, indikerer ikke negativ utstryking nødvendigvis at organismen ikke er til stede. Videre kan tilstedeværelsen av cellulær rusk føre til falske positive, noe som kan føre til forvirring i diagnosen.

Referanse

1. Anvendt klinisk kjemi. (2016). BK Kinyoun Kit. Tilgjengelig på: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun-flekk og to Coccidia hos HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utg.). Argentina, Redaksjonelt Panamericana SA
5. Wikipedia-bidragsytere. "Kinyoun-flekken." Wikipedia, The Free Encyclopedia. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8. Feb 2018. Web. 5. januar 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Implementering av en fargeteknikk for samtidig diagnose av Coccidia og Microsporidia. Institute of Hygiene ved University of the Republic. Montevideo. Uruguay. Tilgjengelig på: hygiene.edu.uy