NEGATIV FARGING: BEGRUNNELSE, TEKNIKK, FORDELER OG ULEMPER - BIOLOGI - 2026

Den negative fargingen er en metode for spesiell farging for å markere tilstedeværelsen av kapsel i noen mikroorganismer , hovedsakelig Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae og Cryptococcus neoformans-, fra kliniske prøver eller rene kulturer.

Den direkte prøven som vanligvis brukes til å påføre negativ farging, er cerebrospinalvæske. Denne teknikken representerer et raskt alternativ for den presumptive diagnosen hjernehinnebetennelse, spesielt Cryptococcus neoformans.

A. Tannstein som er farget med indisk blekk, B. Cryptococcus neoformans var gatti svakt innkapslet slik det forekommer i naturen ved bruk av nigrosin. C. Cryptococcus neoformans var gatti med en tykk kapsel som finnes i sin parasittform, ved bruk av nigrosin. D. Cryptococcus neoformans med lett fortynnet India-blekk. Gisell Quinde, fra Wikimedia Commons / CDC, via Wikimedia Commons / Photo Credit: Innholdsleverandører (r): CDC / Dr. Leanor Haley, via Wikimedia Commons

På samme måte kan denne flekken påføres sputum og sterile væsker generelt, så vel som på stammer oppnådd fra unge, rene kulturer. Denne teknikken bruker nigrosin eller India blekk for utførelse; Derfor er det en veldig enkel og billig metodikk å anvende som gir informasjon med stor diagnostisk verdi på kort tid.

På denne måten er ethvert laboratorium i stand til å utføre denne fargingen. Selvfølgelig må laboratoriet ha kompetent personell, som er i stand til å gjenkjenne isolerte eller spirende Cryptococcus neoformans gjær og skille dem fra leukocytter og artefakter som prøven kan presentere.

Basis

Nigrosine og India blekk fungerer på en lignende måte; Derfor kan begge av de to stoffene brukes om hverandre.

Denne teknikken kalles negativ farging fordi den virker på en motsatt måte som resten av fargeteknikkene. I dette er det som forblir uskadd strukturen som blir søkt eller som man ønsker å se; det vil si mikroorganismer.

Derfor er farging basert på å farge bunnen av smøret en mørk farge. I dette scenariet vil de kapslede strukturene skille seg ut i lys eller fargeløs farge.

Generelt er gjærene friskende, omgitt av en klar glorie som tilsvarer kapsel. Dette skjer fordi India blekk og nigrosin er stoffer som ikke klarer å trenge gjennom polysakkaridet som utgjør kapselen til levende mikroorganismer.

Det er verdt å merke seg at andre strukturer som kan være til stede i den direkte prøven, for eksempel leukocytter eller røde blodlegemer, ikke trenger inn.

Imidlertid, hvis mikroorganismene er døde, kan fargestoffet trenge inn i dem, slik at denne farging også er nyttig for å evaluere levedyktigheten til mikroorganismene.

Teknikk

materialer

Nigrosine

Nigrosine skylder navnet på den svarte fargen den har. Det er et syntetisk stoff som oppnås ved å varme opp blandingen av organiske forbindelser, så som nitrobenzin, anilin og anilinhydrokloritt, ved å bruke en katalysator (jern eller kobber) i nevnte reaksjon.

Kinesisk blekk

Kinesisk blekk er et stoff som hovedsakelig brukes av asiater til å skrive, lage kunstverk og monokromatisk maleri. Det er veldig populært i kinesisk kultur.

Det er oppnådd fra blekksprutblekk blandet med pulverisert trekull, produktet av brennende trinn med lite harpiks.

Det er også mulig å tilberede det fra sot fra forbrenning av hydrokarboner (vegetabilske oljer), sammen med en proteingelatin som gir den riktig konsistens for å unngå utfelling av karbonpartikler.

Spesifikasjoner for prøvetaking

- Det krever ikke faste.

- CSF, sputum eller steril væskeprøve må inneholde minst 1 ml volum og må umiddelbart overføres til laboratoriet ved romtemperatur.

- CSF- og sterile væskeprøver må tas av en spesialisert lege.

- Det kan også være en ren kultur av en mistenkelig belastning knyttet til de nevnte patogenene.

Utførelse av teknikken med direkte prøver

- Prøvene må sentrifugeres, deretter kastes supernatanten og sedimentet tas.

- En dråpe sentrifugert materiale (sediment) og en dråpe India blekk eller nigrosin blir lagt på et rent lysbilde.

- Den skal blandes godt og dekkes med et dekkglassark, slik at dråpen kan spre seg som en tynn film uten å gå over kantene.

- Deretter monteres preparatet på mikroskopet.

- Hvis preparatet er for mørkt, kan det fortynnes med vann.

Utførelse av teknikken med stammer fra kultur

- En veldig liten porsjon av en ung kultur tas med en sånål og løses opp i en dråpe India blekk som tidligere var plassert på et rent lysbilde.

- Et dekkglass er plassert på toppen.

- Det observeres i mikroskopet ved 10X og deretter ved 40X.

Du kan også løse opp en del av kolonien i destillert vann, og derfra ta en dråpe og bland den med India-blekket. På denne måten vil ikke preparatet være så tykt, noe som gjør det mulig å observere strukturene isolert; hvis det er folkemengder, vil det ikke bli observert godt.

En annen metodikk er følgende:

- Plasser en dråpe av opphengskulturen i den ene enden av lysbildet.

- Plasser en dråpe nigrosin i samme ende og bland.

- Spre prøven som ved å lage en hematologisk smøre ved hjelp av et annet lysbilde.

- La tørke og se under mikroskopet.

Mikroskopobservasjon

Du må først fokusere med et 10X mål for å ha et bredt syn på feltet. Deretter bør det søkes om det er tydelige mellomrom; hvis det er, fokuser 40X for å se detaljer.

Fordel

- Det er enkelt å henrette.

- Det er en billig teknikk.

- Denne metoden krever ikke at smøret blir fikset til varme eller med kjemikalier; derfor observeres mikroorganismer uten forvrengning.

- Det ferske preparatet trenger ikke å tørkes, så det kan observeres umiddelbart, og gir raskt resultater.

Ulempe

Når de er montert, må ferske preparater overholdes umiddelbart; hvis de får tørke, er det ikke lenger mulig å observere dem, og en ny må installeres.

Vevsfarging med India-blekk

En annen funksjon som India blekk kan utføre er i patologilaboratorier. Dette blir brukt på kirurgisk ekstraherte vevsprøver for å markere svulstens reseksjonsmarginer.

Det markerte vevet sprayes med eddiksyre. Dette fungerer som en mordant og forhindrer at blekk lekker ut når vevet blir utsatt for rutinemessig behandling for biopsipreparatet.

Prosedyren består i å bade vevet i alkohol og xylen, og deretter suge det i parafinvoks. Denne markeringen guider patologen når man observerer vevet, og indikerer hvor den kirurgiske reseksjonsmargin eller andre interessante steder er.

referanser

1. «Nigrosina». Wikipedia, The Free Encyclopedia. 11 jul 2017, 22:46 UTC. 6. januar 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Kinesisk blekk". Wikipedia, The Free Encyclopedia. 1 okt 2018, 03:08 UTC. 6. januar 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J og samarbeidspartnere. (2006). Arbeidspersonell i det autonome samfunnet Extremadura. Spesifikk agenda bind IV. Redaksjonell MAD. Sevilla-Spania, s. 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006). Spesiallaboratorietekniker, Galician Health Service (SERGAS). Spesifikt fagagenda bind 2. Redaksjonell MAD. Sevilla-Spania, s. 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana SA